Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства




Скачать 348.78 Kb.
Название Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства
страница 1/2
Дата публикации 27.05.2014
Размер 348.78 Kb.
Тип Документы
literature-edu.ru > Биология > Документы
  1   2




Электронная публикация








о разработке противоопухолевого препарата СА







состояние на июнь 2001 года






Составители:

от РОНЦ РАМН Ф.В.Доненко внс

от ООО “Хема-Медика” Ю.С.Лебедин руководитель научных разработок

С.В.Чуканов начальник производства


Введение
Эффективное лечение злокачественных опухолей яичника до последнего времени остается серьезной проблемой вследствие высокой резистентности опухолей к проводимому лечению и зачастую агрессивного течения заболевания. Поэтому, наряду с усовершенствованием традиционных подходов к лечению, ведется поиск новых методов.

Гликопротеин, содержащий антиген СА125, экспрессируется в цитоплазматических гранулах и частично на поверхности опухолевых клеток при аденокарциномах различной локализации. Особенно выражена выработка этого гликопротеина в клетках злокачественных серозных опухолей яичника. В некоторых опухолях наблюдается необычная, строго поверхностная локализация антигена СА125.

Из всего многообразия опухоль-ассоциированных эпителиальных антигенов наибольшую известность получил именно антиген СА125, что объясняется его высокой эффективностью при мониторинге эффективности лечения при злокачественных опухолях яичника. При некоторых гистологических формах злокачественных опухолей яичника антиген СА125 не экспрессируется, и сохраняется проблема нахождения альтернативных способов лабораторного мониторинга.

Гликопротеиновая структура, несущая антиген СА125, имеет и другие антигенные участки (эпитопы), распознаваемые другими мышиными моноклональными антителами

Эта же структура может вступать в ассоциации (обратимые комплексы) с другими известными антигенами эпителиальных клеток (PEM/MUC1, sialyl-Lewis, Tn/sialyl-Tn), что подтверждается нашими иммунохимическими данными.

У некоторых индивидов в сыворотке крови обнаруживаются чрезвычайно высокие уровни аутоантител, направленных против компонентов опухоль-ассоциированного поверхностного гликопротеина клеток яичника. Эти антитела частично “перекрывают” известный эпитоп СА125, но захватывают и другие, пока не изученные эпитопные структуры.

Все это позволяет надеяться на то, что в составе опухоль-ассоциированного поверхностного гликопротеина находится большое количество иммуногенных химических структур (эпитопов), которые могут индуцировать протективный иммунный ответ у человека.
На примере противомикробных вакцин видно, что обычными этапами разработки иммунопротективного препарата (вакцины) являются:

  1. максимальная очистка препарата от вредных примесей;

  2. выбор варианта усиления иммунного ответа (модификация антигена, добавление адъюванта, манипуляции с дозами и способом введения, сочетанное применение неспецифических иммуностимуляторов);

  3. расшифровка химической структуры той части антигенного комплекса, которая дает наибольший вклад в протективный иммунный ответ (иммунодоминантный фрагмент);

  4. попытки производить иммунодоминантный фрагмент методами химического синтеза или биотехнологии (рекомбинантная технология).


В нашей разработке пройден первый этап - препарат опухоль-ассоциированного антигена яичника CA, полученный из предварительно отобранного индивидуального опухолевого материала (асцитической жидкости), очищен бихимическими методами; целенаправленно удалены примесные антигены человека, могущие вызвать нежелательные аутоиммунные реакции (например, фибриноген и агрегированный IgG).

Экспериментальные исследования показали, что клетки карциномы яичников мышей СаО1 экспрессируют гликопротеин, сходный по своим антигенным характеристикам с препаратом CA. Это позволило применить мышиную модель для грубой оценки иммуногенности и противоопухолевой активности препарата CA; оценить токсичность препарата; оптимизировать иммуногенность с помощью подбора дозы, способа введения и адъюванта; оценить стабильность готовой лекарственной формы препарата.

Полная расшифровка химической структуры всего антигенного комплекса препарата CA практически недоступна в настоящее время из-за чрезвычайной сложности и огромного масштаба (мол. масса более 1 млн дальтон). Более того, за более 25 лет с момента описания самого важного фрагмента препарата - антигена СА125 - пока не удалось окончательно расшифровать его первичную структуру. Все это практически лишает преимуществ любые высокотехнологические подходы и оставляет исследователям только один способ нахождения иммунодоминантных фрагментов - через иммунизацию больных.

Как уже указывалось выше, созданные на основе опухолевых клеток и опухоль-ассоциированных антигенов препараты, используемые для получения иммунного ответа организма, в зарубежной литературе принято называть вакцинами, а метод лечения - противоопухолевой вакцинацией.

По нашему мнению, имея ввиду его принципиальные отличия от классической вакцинации (таблица 1), более адекватным явлется термин “иммуноадъювантная терапия” или “противоопухолевая модификация биологических реакций”.

Целью настоящей работы является разработка нового нетоксичного метода лечения больных с некоторыми злокачественными опухолями путем введения антигенного препарата и индукции протективного (цитотоксического) иммунного ответа организма, направленного против существующей опухоли.

Предполагается, что CA будет применяться у больных серозной формой злокачественных опухолей яичника с высоким дооперационным уровнем антигена СА125; введение препарата планируется непосредственно после радикального или частичного удаления основного опухолевого узла, совместно с традиционной химиотерапией.

Толерантность иммунной системы больных к гомологичному антигену собственного происхождения предполагается преодолевать за счет манипуляций с дозами, способом введения, адъювантами и неспецифическими иммуностимуляторами.
Таблица 1


КЛАССИЧЕСКАЯ ВАКЦИНАЦИЯ

иммуноадъювантная терапия


1. Антиген микробиологического происхождения и чужероден для человека и экспериментальных животных

1. Антиген человека



2. Антиген вводится только здоровому индивиду

2. Антиген вводится больному, в сыворотке которого он также определяется.

Априорно предполагается наличие у больного феномена толерантности к собственному антигену.

3. Антиген вводится в целях профилактики

3. Антиген вводится в лечебных целях на этапе после удаления собственного источника антигена.


4. Антигены, как правило, высокоиммуногенны

  1. Антигены низкоиммуногенны.




5. Доказано участие гуморального иммунитета (протективных антител)

5. Роль гуморального ответа (аутоантител) в индукции противоопухолевого ответа не очевидна


Целью применения препарата CA является максимальная отсрочка рецидива заболевания или роста метастазов при исчерпании эффективности химиотерапевтических препаратов.
Литература.

1. Kantor J., Irvine K., Abrams S., Snoy P., Olsen R., Greiner J., Kaufman H., Eggensperger D., Sclom J. (1992) Immunogenicity and safety of recombinant vaccina virus vaccine expressing the carcinoembryonic antigen gene in nonhuman primate. Cancer Res. 52: 6917.

2. Hoover H.C., Brandhorst J.S., Peters L.C., Srudyke M. G., Takeshita Y., Madariagy I., Muenz L.R., Hanna M.G, Jr. (1993) Adjuvant active specific immunotherapy for human colorectal cancer: 6.5 year median follow-up of a phase III prospective trial. J. Clin. Oncol. 11:390-399.

3. McLaughlin J.P., Schlom J., Kantor J.A., Greiner J.W. (1996) Improved immunotherapy of a recombinant carcinoembryonic antigen vaccinia vaccine when given in combination with interleukin-2. Cancer Res. 56,10:2361-2367

4. Rragupathi G. Carbohydrate antigens as targets for active specific immunotherapy. Cancer Immunol. Immunother.(1996) 43,3:152-157.

5. Foon K. A., Chakraborty M., John W.J., Sherratt A., Kohler H., Brettacharyachatterjee M. Immune response to the carcinoembryonic antigen in patients treated with an anti-idiotype antibody vaccine. J. Of Clin. Invest. 96:1(1995), 334-342.

6. Fagerberg J., Samanci A., Yi O., Strigard K., Frodin J., Wahren B., Ruden U., Mellstedt H. (1995) Recombinant carcinoembryonic antigen and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor for active immunization of colorectal carcinoma patients. J. Immunother.18:132 -137.

7. Conry R.M., Saleh M.N., Schlom J., LoBuglio A.F(1995) Human immune response to carcinoembryonic antigen tumor vaccines. J.Immunother. 18:137 -142.

Conry R.M., LoBuglio A.F., Loechel F., Moore S.E., Sumerel L.A., Barlow D.L., Curiel D.T. (1995) Immune response to a carcinoembryonic antigen polynucleotide vaccine. Cancer Res. 54:1164.

8. Bei R., Kantor J., Kashmiri S.V.S., Abrams S., Schlom J. Enhanced immune responses and anti-tumor activity by baculovirus recombinant carcinoembryonic antigen (CEA) in mice primed with the recombinant vaccina CEA. J. Of Immunotherapy 16: 1994.-275-282.

9. Barratt-Boyes S.M. Making the most of mucin: a novel target for tumor immunotherapy. Cancer Immunol. Immunother. (1996) 43, 3.-142-151.

10. Liu X.H., Sejbal J., Kotovych G., Koganty R.R., Reddish M.A., Jackson L., Gandhi S.S., Mendonca A.J., Longenecker B.M. Structurally defined synthetic cancer vaccines: Analysis of structure, glycosylation and recognation of cancer associated mucin MUC-1 derived peptides. Glycoconjugate J. 12:5(1995), 607 - 617.
#1 Отчет об изучении иммуногенности препарата CA в экспериментальной модели.

МЕТОДЫ:

В работе использовали мышей самцов-гибридов F1 в возрасте 2-3 месяцев. Животные были получены из питомника п. Столбовой Московской области. Условия содержания животных соответствовало “Санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)”, утвержденным МЗ СССР 06.07.73 г. и приказом МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г. Животные получали стандартную диету в виде гранулированного корма по нормам, соответствующим дополнению от 04.07.78 к приказу МЗ СССР № 163 от 10.03.66 г. “О суточных нормах кормления лабораторных животных и продуцентов”. Эксперименты на животных проводили в осенне-зимний период.

Кинетику иммунного ответа на препарат CA определяли после однократного подкожного введения препарата в дозе 100 мкг/мышь. Титр антител определяли методом иммуноферментного анализа с использованием набора фирмы "Roche" на 10 и 17 сут после введения CA. В каждой группе использовали по 10 животных.
РЕЗУЛЬТАТЫ:

Выявлено, что после введения животным препарата CA, у мышей развивается стандартный иммунный ответ с преобладанием в начальные сроки развития (до 12-13 дня) иммуноглобулинов класса Ig M, а в более поздние - иммуноглобулинов класса Ig G.

#2 Отчет об изучении острой токсичности противоопухолевого препарата CA.
МЕТОДЫ: см. #1

Эксперименты на животных проводили в осенне-зимний период. Токсическое действие оценивали по изменению веса тела и средней продолжительности жизни животных, получивших препарат по сравнению с контрольной группой. Препарат вводили подкожно в дозе 1 мг/мышь по следующей схеме: 1, 2, 3, 10, 17 и 24 сутки. Животных взвешивали на 2, 9, 16, 18 и 30 сутки после последней инъекции. Срок наблюдения за животными составлял 60 суток.

В каждой группе использовали по 10 животных. Статистическую обработку данных проводили методом Фишера-Стъюдента. Различия считали достоверными при Р<0.05.
РЕЗУЛЬТАТЫ:

Введение мышам препарата CA не приводило к проявлению побочных действий: динамика изменения веса тела животных практически не отличалось от контрольной группы. Не зарегистрирована гибель животных и не обнаружено раздражающего действия в месте введения препарата.
#3 Отчет об изучении биохимических показателей крови животных при применении препарата CA
МЕТОДЫ: см. #1

Исследование биохимических показателей крови животных, получивших препарат CA, проводили в сравнении с интактной контрольной группой. Препарат вводили подкожно в дозе 1 мг/мышь по следующей схеме: 1, 2, 3, 10, 17 и 24 сут. Забор крови проводили на следующий день после последней инъекции.

В каждой группе использовали по 10 мышей. Статистическую обработку данных проводили методом Фишера-Стъюдента. Различия считали достоверными при Р<0.05.
РЕЗУЛЬТАТЫ:

Введение мышам CA не приводило к проявлению побочных действий: динамика изменения биохимических показателей крови у животных, получивших препарат (таблица 1) не отличается от контрольной группы.
Таблица 1

Влияние иммунизации мышей препаратом CA на биохимические показатели крови животных.


Показатели крови


CA

Контроль

Общий билирубин


3.86 + 0.65**

4.54 + 0.80

Прямой билирубин


1.94 + 0.12*

1.90 + 0.10


Креатинин

29.71 2.60*

36.34 2.73


АЛТ

33.50 2.88*

35.86 1.57

АСТ

169.51 27.22*

226.03 18.56

Креатинкиназа


2409.71652.87*

2568.57867.36

P - достоверность различий между контрольной и опытной группами.

* P>0.5

** P>0.1

#4 Отчет об изучении острой токсичности препарата CA
МЕТОДЫ: см. #1

Токсическое действие оценивали по изменению веса тела и средней продолжительности жизни животных, получивших CA по сравнению с контрольной группой. Препарат вводили подкожно в дозе 1 мг/животное по следующей схеме: 1, 2, 3, 10, 17 и 24 сутки. Животных взвешивали на 2, 9, 16, 18 и 30 сутки после последней инъекции. Срок наблюдения за животными составлял 60 суток.

В каждой группе использовали по 10 мышей или 6 крыс. Статистическую обработку данных проводили методом Фишера-Стъюдента. Различия считали достоверными при Р<0.05.

РЕЗУЛЬТАТЫ:

Введение мышам препарата CA не приводило к проявлению побочных действий: динамика изменения веса тела животных практически не отличалось от контрольной группы (таблица 2). Не зарегистрирована гибель животных и не обнаружено раздражающего действия в месте введения препарата.

Таблица 2

Влияние CA на вес тела мышей.

Время после иммунизации

(сут.)


Контроль

CA


0

21.0 0.2

21.0 0.3*

2

24.2 0.3

24.3 0.4*

9

25.7 0.6


26.1 0.7*

16

26.9 0.6


27.1 0.7*

18

27.1 0.7


27.4 0.7*

30

29.8 0.8

30.1 0.7*

Р - достоверность различий между опытной и контрольной группами.

* Р>0.5

**Р>0.1

Аналогичные результаты были получены при введение CA крысам. Динамика изменения веса тела животных практически не отличается от контрольной группы (таблица 3). Не зарегистрирована гибель животных и не обнаружено раздражающего действия в месте введения препарата.

Таблица 3

Влияние CA на вес тела крыс.

Время после иммунизации

(сут.)


Контроль

CA

0

21.0 0.2

21.0 0.3*

2

24.2 0.3

24.3 0.4*

9

25.7 0.6


26.1 0.7*

16

26.9 0.6


27.1 0.7*

18

27.1 0.7


27.4 0.7*

30

29.8 0.8

30.1 0.7*

Р - достоверность различий между опытной и контрольной группами.

* Р>0.5

**Р>0.1

#5 Отчет об изучении биохимических показателей крови животных при применении препарата CA.
МЕТОДЫ:

В работе использовали мышей самцов-гибридов F1 в возрасте 2-3 месяцев и беспордных крыс самцов в возрасте 3 месяцев. Животные были получены из питомника п. Столбовой Московской области. Условия содержания животных соответствовало “Санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)”, утвержденным МЗ СССР 06.07.73 г. и приказом МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г. Животные получали стандартную диету в виде гранулированного корма по нормам, соответствующим дополнению от 04.07.78 к приказу МЗ СССР № 163 от 10.03.66 г. “О суточных нормах кормления лабораторных животных и продуцентов”. Эксперименты на животных проводили в осенне-зимний период.

Исследование биохимических показателей крови животных, получивших препарат CA, проводили в сравнении с интактной контрольной группой. Препарат вводили подкожно в дозе 1 мг/животное по следующей схеме: 1, 2, 3, 10, 17 и 24 сут. Забор крови проводили на следующий день после последней инъекции.

В каждой группе использовали по 10 мышей или 6 крыс. Статистическую обработку данных проводили методом Фишера-Стъюдента. Различия считали достоверными при Р<0.05.
РЕЗУЛЬТАТЫ:

Введение мышам CA не приводит к проявлению побочных действий: динамика изменения биохимических показателей крови у животных, получивших препарат (таблица 4) не отличается от контрольной группы.
Таблица 4

Влияние CA на биохимические показатели крови у мышей.


Показатели крови


CA

Контроль

Общий билирубин


3.86 + 0.65**

4.54 + 0.80

Прямой билирубин


1.94 + 0.12*

1.90 + 0.10


Креатинин

29.71 2.60*

36.34 2.73


АЛТ

33.50 2.88*

35.86 1.57

АСТ

169.51 27.22*

226.03 18.56

Креатинкиназа


2409.71652.87*

2568.57867.36

P - достоверность различий между контрольной и опытной группами.

* P>0.5

** P>0.1

Аналогичные результаты были получены при введении CA крысам. Динамика изменения биохимических показателей крови у животных, получивших препарат (таблица 5) не отличается от контрольной группы.
Таблица 5

Влияние CA на биохимические показатели крови у крыс.


Показатели крови


CA

Контроль

Общий билирубин


3.86 + 0.65**

4.54 + 0.80

Прямой билирубин


1.94 + 0.12*

1.90 + 0.10


Креатинин

29.71 2.60*

36.34 2.73


АЛТ

33.50 2.88*

35.86 1.57

АСТ

169.51 27.22*

226.03 18.56

Креатинкиназа


2409.71652.87*

2568.57867.36

P - достоверность различий между контрольной и опытной группами.

* P>0.5

** P>0.1
#6 Отчет об изучении сочетания повышенного уровня эндогенных гомологов препарата CA, содержащих антиген СА125 в сыворотке крови с изменениями биохимических и клинических показателей у онкологических больных.
МЕТОДЫ:

Для прогноза возможной токсичности препарата CA у онкологических больных, был проведен анализ архивного материала 15 историй болезни пациентов РОНЦ с раком яичников I - IV стадий в возрасте 37 - 64 лет с уровнем СА125 от 41.5 Ед/мл до 1436.8 Ед/мл и 1 больной раком шейки матки 63 лет с уровнем СА125 163.6 Ед/мл (таблица 9). Дискриминационное значение этого маркера составляет 35 Ед/мл. При среднем объеме циркулирующей крови 4000 мл и гематокрите 50% общее содержание антигена СА125 в крови больных составляет от 8000 до 3 млн Ед.

Содержание антигена СА125 в препарате CA составляет 200000 Ед/мл; соответственно предполагаемое количество в одной инъекционной дозе составит 200 тысяч Ед, что сопоставимо с количеством циркулирующего антигена.

Сочетание повышенного содержания антигена СА125 с изменениями биохимических и клинических показателей у онкологических больных оценивали по содержанию в сыворотке крови лейкоцитов, тромбоцитов, гемоглобина, глюкозы, мочевины, креатинина, общего билирубина, общего белка, альбумина, активности аланинаминотрансферазы, аспартат-аминотрансферазы, лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы, гаммаглутамилтранспептитазы [1]. У обследуемых больных отмечали наличие сопутствующих заболеваний.

РЕЗУЛЬТАТЫ:
Результаты анализа историй болезни онкологических больных с повышенным уровнем циркуляции антигена СА125 в крови представлены в таблице 6.
Таблица 6

Изучение сочетания повышения уровня антигена СА 125 с показателями крови и наличием сопутствующих заболеваний у онкологических больных.


п/п

Стадия заболевания

Воз- раст

Уровень СА 125 Ед/мл

Сопутств. заболев.

Отклонения по-

казателей от N

1


III

51

251.9

-

мочевина -9.3

ЩФ - 260

2

рецидив



57

166.0

-

-

3.

III

37

41.5

-

-

4.



IY



46

1205.2

-

мочевина -8.2


5

II


50

882.1

-

общ.белок - 89.3

ЛДГ - 473

6

IY


45

1144.2

-

-

7.


II

49

81.2

-

-

8

IY


53

613.1

-

АЛТ - 55.6

гамма-ГТ - 71.8

9

р.ш.м. III


63

163.6

-

-

10

I


50

121.1

-

альбумин - 50.3

11

III


41

566.6

-

глюкоза - 6.89

12

IY


58

1227.3

-

мочевина - 8.3

общ.белок - 57.4 альбумин - 32.9

13

IY

57

116.0

-

ЩФ - 301

14

III

64

275.5

-

альбумин - 32.6

ЛДГ - 733

15

III

47

1436.8







16

III

64

902.8

-

глюкоза - 7.43

Обнаружено, что у 16 наблюдаемых больных не отмечено зависимого от уровня СА125 изменения показателей количества лейкоцитов и тромбоцитов. Колебания в количестве лейкоцитов составили 3.13 - 7.6 х 109/л, тромбоцитов 167 - 485 х 109/л. Колебания содержания гемоглобина составили 9.9 - 14.9 х г/л.

Обнаружено, что не наблюдается зависимого от уровня СА125 изменения уровня активности гамма-ГТ (определен у 3 б-ных и составил 28.0, 28.1 и 71.8 ед/л), аспартат-аминотрансферазы (определен у 11 б-ных, колебания составили 11.3 - 29.7 ед/л), аланин-аминотрансферазы (14 б-ных: 8.3 - 38 ед/л, у 1 б-ной уровень активности АЛТ был повышен и составил 55.6 ед/л), щелочной фосфатазы (11 б-ных: 85.0 - 228 ед/л, еще у 2 б-ных уровень ЩФ был повышен и составил 260 и 301 ед/л) и содержания общего билирубина (16 б-ных: 3.1 - 13.6 мкмоль/л), альбумина (13 б-ных: 37.6 - 49.4 г/л, еще у 2 б-ных содержание альбумина было понижено и составило 32.6, 32.9 г/л, у 1 б-ной повышено - 50.3 г/л) и глюкозы (14 б-ных: 4.4 - 5.87 ммоль/л, еще у 2 б-х уровень глюкозы был повышен и составил 6.89 и 7.43 ммоль/л).

Не наблюдалось зависимого от уровня СА125 изменения содержания мочевины (13 б-ных: 2.6 - 7.9 ммоль/л, у 3 б-ных уровень мочевины был повышен и составил 8.2, 8.3 и 9.3 ммоль/л), креатинина (15 б-х: 65.0 - 107.0 кмоль/л) и общего белка (14 б-ных: 66 - 85.4 г/л, у 1 б-ной содержание общего белка было повышено - 89.3 г/л и у 1 больной понижено - 57.4 г/л).

Не наблюдалось зависимого от уровня СА125 влияния на активность лактатдегидрогеназы. Активность этого фермента у 4 б-ных составила (299, 389, 473 и 733 ед/л).

У пациентов в период определения уровня СА125 не зарегистрировано стоматита, тошноты или рвоты и диареи, не отмечено повышения температуры и аллергических реакций.

Таким образом, не удается выявить корреляции между уровнем СА125 и каким-либо биохимическим или клиническим параметром больных. Эти результаты позволяют подтвердить данные западных исследователей о отсутствии какой-либо формы токсичности у этих веществ.

#7 Отчет об изучении иммунопротективного эффекта препарата CA на модели мышей с карциномой яичников СаО1 после инокуляции различного количества опухолевых клеток.
МЕТОДЫ: см. #1

CA вводили подкожно в дозе 1 мг/мышь по следующей схеме: 1, 2, 3, 10 сутки и далее 1 раз в неделю в течении трех месяцев. Такая схема введения препарата связана с тем, что в предварительных исследованиях была показано благоприятное прогностическое значение выработки специфического IgG, но не IgM.

Карциному яичников мышей СаО1 трансплантировали подкожно на 7 сутки после последней инъекции CA. Клетки выделяли из опухолевых узлов путем мягкого механического нажатия и последующей фильтрацией для отделения одиночных клеток. Качество клеточной популяции контролировали методом проточной цитофлуориметрии. Количество инокулирумых клеток считали в камере Горяева. Срок наблюдения за животными после трансплантации опухоли составил 60 суток.

В каждой группе использовали по 10 животных. Статистическую обработку данных проводили методом Фишера-Стъюдента. Различия считали достоверными при Р<0.05.
РЕЗУЛЬТАТЫ:

Предварительная иммунизация мышей препаратом CA перед трансплантацией карциномы яичников СаО1 приводит к достоверному увеличению количества животных без развившейся опухоли в группах, получивших по 104 и 105 клеток (таблица 10). Так, у животных, получивших 104 клеток, в контрольной группе опухоль развилась у 30% мышей, а после предварительной иммунизации у всех животных опухоль не определялась в течение 60 суток наблюдения. У животных, получивших 105 клеток, в контрольной группе опухоль развилась у 90% мышей, а после предварительной иммунизации у 80% животных опухоль не определялась в течение 60 суток наблюдения.
Таблица 7

Влияние предварительной иммунизации мышей препаратом CA на выживаемость животных с карциномой яичников СаО1 после инокуляции различного количества опухолевых клеток.


Количество инокулирован-ных клеток

Количество выживших животных в процентах к исходному
иммунизированные мыши контроль

104

100

70

105

80

10

106

10

0

107

0

0



#8 Отчет об изучении противоопухолевой активности препарата CA у мышей с карциномой яичников СаО1.
МЕТОДЫ: см. #1

Клетки рака яичников мышей СаО 1 трансплантировали подкожно по 106 клеток в 0.3 мл среды 199. Препарат CA вводили подкожно в дозе 100 мкг/мышь по следующей схеме: 1, 2, 3, 10, 17 сут после трансплантации опухоли. Раствор альбумина вводили подкожно в дозе 100 мкг/мышь по той же схеме. Терапевтическое действие препарата CA оценивали по торможению роста опухоли и изменению продолжительности жизни животных, получивших специфическую иммунотерапию по сравнению с мышами, получившими альбумин и с нелечеными животными. Размер опухоли определяли на 14, 18, 21 сутки после трансплантации. В каждой группе использовали по 10 животных. Статистическую обработку данных проводили методом Фишера-Стъюдента. Различия считали достоверными при Р<0.05.

Титр антител против препарата CA измеряли методом иммуноферментного анализа на 16 день после трансплантации опухоли. CA вводили по описанной ранее схеме. В каждой группе использовали по 10 животных.
РЕЗУЛЬТАТЫ:

Показано, что введение CA мышам с трансплантированной карциномой яичников СаО1 приводит к 40 - 60% увеличению продолжительности жизни животных по сравнению с группой животных, получивших альбумин и контрольной группой. Так, средняя продолжительность жизни животных, получивших специфическую иммунотерапию составила 26.8 + 2.0 сут. Средняя продолжительность жизни животных, получивших альбумин была практически такой же как в контрольной группе и составила 19.3 + 0.6 сут. и 19.6 + 0.6 сут. соответственно.

Для оценки иммуногенности препарата CA и связанной с ней противоопухолевой активностью был определен титр антител против препарата CA. Показано, что коэффициент корреляции между размером опухоли и титром иммуноглобулинов Ig M составляет -0.4, а коэффициент корреляции между размером опухоли и титром иммуноглобулинов Ig G составляет -0.6. Знак минус указывает на то, что, чем выше уровень противоопухолевых антител, тем меньше размер опухоли.

#9 Отчет об изучении экспрессии антигена СА125 на поверхности клеток злокачественных опухолей яичника человека.
Для изучения экспрессии антигена СА125 на поверхности клеток злокачественных опухолей яичника были использованы естественные человеческие аутоантитела против опухоль-ассоциированных гликопротеинов яичника, аффинно-очищенные на иммобилизованном антигене.

Клетки злокачественных опухолей яичника выделяли из асцитной жидкости и опухолевых узлов, полученных при проведении лечебных мероприятий.
Методы.

Человеческие IgG-аутоантитела, выделенные методом аффинной хроматографии, метили флуоресцентной меткой. Связывание меченых антител с опухолевыми клетками опухолей молочной железы и яичника человека регистрировали с помощью проточной цитофлуориметрии. Опухолевые клетки получали из асцитической жидкости и из опухолевых узлов как первичных больных, так и больных, получивших лечение. Взаимодействие антител и опухолевых клеток оценивали методом проточной цитофлюориметрии.
Результаты.

Было изучено связывание специфических аутоантител человека с материалом, полученным от 18 больных. Взаимодействие асцитических клеток с моноклональными антителами в отмечено в 16%, а клеток полученных из опухолевых узлов - 80%. Процент положительных клеток в определяемой популяции колебался от 17 до 98%.
Заключение. Таким образом, полученные человеческие аутоантитела взаимодействуют с поверхностными антигенами опухолевых клеток. Процент взаимодействия выше в опухолевых узлах, чем в асцитной жидкости. Это, вероятно, связано с тем, что в асцитической жидкости присутствует существенный процент неопухолевых клеток (например, мезотелиоциты), тогда как в узле большинство клеток - опухолевого происхождения.


ВЫВОДЫ:


1.

Установлена противоопухолевая эффективность иммунотерапии препаратом CA в эксперименте.


2.

Не обнаружена токсичность препарата.


3.

Установлена экспрессия антигена, соответствующего разработанному препарату, на поверхности опухолевых клеток больных и потенциальная возможность индукции антител у человека.


4.

Определены критерии для мониторинга эффективности иммунотерапии с коэффициентом корреляции (r=-0.6) - это уровень специфических IgG.

ПРОГНОЗИРУЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИ ВОЗМОЖНОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПРЕПАРАТА CA КЛИНИКЕ.



1.

ОТСУТСТВИЕ ТОКСИЧНОСТИ.


2.

ОТВЕТ НА СПЕЦИФИЧЕСКУЮ ИММУНОТЕРАПИЮ БУДЕТ ЗАРЕГИСТРИРОВАН У 40 - 60% БОЛЬНЫХ.


3.

СРЕДНЯЯ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ЖИЗНИ У ОТВЕТИВШИХ БОЛЬНЫХ ВЫШЕ НА 20 -25 %

Заключение

В литературных данных показано, что препараты, созданные на основе опухолевых клеток и опухоль-ассоциированных антигенов человека не обладают токсичностью во всех изученных дозах и режимах на различных видах животных (от грызунов до высших приматов). В наших исследованиях получены аналогичные результаты:

  1. Препарат CA, созданный на основе естественного антигена, не токсичен при их введении мышам в дозах в 1000 раз превышающих рекомендуемую терапевтическую.

  2. Не обнаружено данных, позволяющих связать высокие уровни антигена в сыворотке крови больных с какой-либо формой токсичности их у человека.

  3. Показано, что разработанная лекарственная форма CA не проникает ни в лимфу, ни в кровь. Данное наблюдение снимает (наряду с данными литературы) все вопросы о возможном побочном системном действии CA на организм больного и делает целесообразным изучение только местных побочных эффектов.

  4. Не было обнаружено никаких признаков местно-раздражающего действия при подкожном и внутримышечном введении CA животным даже на пике иммунного ответа.


Таким образом, исходя из литературных данных и результатов собственных исследований можно прогнозировать, что введение CA онкологическим больным не будет вызывать побочных проявлений и основной проблемой явится не выраженные реакции организма, а их отсутствие, связанное с низкой иммуногенностью опухолевых антигенов.

ВРЕМЕННАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Срок введения устанавливается с

“___”_____________200 г.

Срок действия до

“___”_____________200 г.
Настоящая временная фармстатья распространяется на иммуномодулятор направленного действия CA, применяемый для специфической иммунотерапии онкологических больных.
ОПИСАНИЕ
Препарат представляет собой лиофилизированный порошок белого цвета без запаха.
РАСТВОРИМОСТЬ
Результаты: Препарат хорошо растворим в воде и изотоническом растворе хлорида натрия (ГФ XI, вып.1, стр. 175).
ПРОЗРАЧНОСТЬ РАСТВОРА
Раствор препарата в 0.9% изотоническом растворе хлорида натрия (200 мкг/мл) должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталонным раствором 1 (ГФ XI, вып.1, стр. 198).
ИЗДАНИЕ ОФИЦИАЛЬНОЕ ПЕРЕПЕЧАТКА ВОСПРЕЩЕНА

ЦВЕТНОСТЬ РАСТВОРА
Окраска раствора препарата в 0.9% изотоническом растворе хлорида натрия (200 мкг/мл) не должна по интенсивности превышать эталон 6 (ГФ XI, вып.1, стр. 760).

  1   2

Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства icon Научный центр психического здоровья эндогенные заболевания шизофренического спектра
Олейчик И. В. к м н., руководитель отдела научной информации нцпз рамн, старший
Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства icon Концепция образовательного комплекса «Школа Сколково Тамбов»
...
Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства icon Программа рассчитана
Авторы-составители: Г. С. Меркин, С. А. Зинин, В. А. Чалмаев. – 7-е изд – М.: Ооо «тид «Русское слово – рс», 20011 – 200 с
Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства icon Прогнозирование отложения сульфатных солей при добыче нефти (на примере...
Ооо «Лукойл-Инжиниринг» «Печорнипннефть», начальник отдела проектирования и мониторинга разработки Ярегского месторождения
Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства icon Программа рассчитана
Авторы-составители: Г. С. Меркин, С. А. Зинин, В. А. Чалмаев. – 5-е изд., испр и доп. – М.: Ооо «тид «Русское слово – рс», 2009 –...
Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства icon Программа рассчитана
Авторы-составители: Г. С. Меркин, С. А. Зинин, В. А. Чалмаев. – 5-е изд., испр и доп. – М.: Ооо «тид «Русское слово – рс», 2009 –...
Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства icon Программа рассчитана
Авторы-составители: Г. С. Меркин, С. А. Зинин, В. А. Чалмаев. – 5-е изд., испр и доп. – М.: Ооо «тид «Русское слово – рс», 2009 –...
Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства icon Психология рекламы
К отрасли психологической науки. В ней наиболее полно представлены основные теоретические направления, история развития психологии...
Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства icon Ооо «лит» группы компаний «Скайград», 141090, г. Юбилейный Московской...
Организация производства рзм при комплексной переработке фосфогипса. Актуальные вопросы
Составители: от ронц рамн ф. В. Доненко внс от ООО “Хема-Медика” Ю. С. Лебедин руководитель научных разработок С. В. Чуканов начальник производства icon Пояснительная записка (8 кл. 68 ч.) Данная рабочая программа составлена...
Данная рабочая программа составлена на основе Программы по литературе для 5 – 11 классов общеобразовательной школы / авторы-составители...
Литература


При копировании материала укажите ссылку © 2015
контакты
literature-edu.ru
Поиск на сайте

Главная страница  Литература  Доклады  Рефераты  Курсовая работа  Лекции